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人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)


来源: 生物耗材网    发布日期: 2017-1-5  
  

货号: ST02001

规格: 500ml

无血清/无饲养层培养基(SFM)在缺乏血清和饲养层情况下培养人的干细胞能支持细胞的生长,包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。

产品描述:

StemmeraTM人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)是一种成分明确的即用型培养基,特殊的配方,在完全无血清和无饲养层环境下能用于人诱导多能干细胞(hiPSCs)和胚胎干细胞(hESC)的复制、增殖和维持生长。

产品成分:

成分

规格

存储

货号

含左旋谷氨酰胺和碳酸氢钠的基本培养基

500ml

2°C to 8°C

ST02001-BM

SFM 添加物

3.5ml

-20°C

ST02001-S1

两种成分混合后是一种即用型完全培养基

存储和运输

StemmeraTM hStemSFM中的两种成分是分开运输的,基本培养基在室温下运输然而SFM添加物是在干冰环境下运输。在收到产品后基本培养基需存储在2-8°C环境中而SFM需要存储在-20°C,避免多次冻融。完全培养基储存在2-8°C的黑暗环境中能使用长达1个月。完全培养基分成等份的供每日使用,避免升温循环,避光保存。

产品使用:该产品是仅用于体外使用和研究使用。不可用于人类或动物的诊断或治疗使用。

使用注意事项:

1.    使用aerosol barrier枪头,每次用完更换新的枪头。

2.       要用新的,干净的手套和穿实验白大褂。

3.       材料安全数据表(MSDS)可在网站下载。

4.       用70%乙醇或其他合适的消毒剂清洁工作空间。

培养条件:

培养基:StemmeraTM hStemSFM。

细胞:人诱导多能干细胞(hiPSCs)和人胚胎干细胞(hESCs)。

培养类型:单细胞传代培养和贴壁培养。

温度范围:37°C。

孵化器的环境:在含5% CO2或5% O2的潮湿环境中,确保适当的气体交换,减少暴露。

建议培养容器:基质胶包被的板子、皿或烧瓶(Corning,货号: 356231,稀释比1:100),根据容器的大小,调整细胞数量。

操作手册:

•        完全SFM培养基的准备:添加3.5ml冷冻SFM添加物(货号 ST02001-S1)到500ml基础培养基中(货号st02001-bm 500ml),拌匀, 0.22µM滤膜过滤。

•        将完全培养基分成等份以供每天使用、使用前需在室温下预热SFM。

•        Corning基质胶包被培养容器:使用Corning基质胶(货号356231,稀释比1:100)包被容器,在5% CO2或5% O2(低氧孵育器)的孵育器中37 oC孵育至少30min或过夜。已包被的容器能在一周内使用。使用前,立即倒掉所有的基质胶,更换预热的完全StemmeraTM hStemSFM培养基。

注意:所有成分在失效日期前存储在黑暗的2-8oC环境中,完全培养基StemmeraTM hStem SFM能稳定储存时间长达4周。

在完全培养基hStemSFM 中完成hiPSCs hESCs细胞的复苏

1.         37°C水浴迅速解冻一小瓶冷冻人干细胞。

2.         用移液管轻轻将小瓶中的所有干细胞都吸入含完全培养基的15ml无菌离心管中。

3.         在1000转下离心5min。

4.         小心地吸弃上清液,避免干扰细胞颗粒。

5.         在含10nM Rock 抑制剂Y27632(Fisher Scientific, 货号50-863-7)的1ml预热完全培养基中重悬浮细胞。

6.         将细胞转入基质胶包被的6孔板中,在每孔中加入足够的完全培养基(2ml/孔)。

7.         在一个5% CO2或5% O2(低氧孵育器)的孵育器中,在含Rock 抑制剂的完全SFM培养基下37 oC过夜孵育细胞。

8.         第二天更换培养基为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基,每天更换培养基直到细胞达到80-90%的覆盖度并继代培养。

在完全StemmeraTM hStemSFM培养基中继代培养干细胞

9.         细胞达到80-90%的覆盖度,吸弃已无营养的培养基

10.     加入1ml StemmeraTM非酶细胞裂解液(货号ST03001)到培养板中的每孔中。保证单层细胞完全被覆盖。在一个5% CO2或5% O2(低氧孵育器)的孵育器中37 oC孵育5min。

11.     在倒置显微镜下定期观察细胞,直到细胞开始汇合。(注:避免细胞脱落,检查一下排除故障)。

12.     从培养孔中吸弃细胞裂解液(避免细胞变干)。

13.     加入1ml完全SFM培养基到培养板的每个孔中,用1ml移液器的吸管尖端上下轻轻吸打细胞几分钟使得细胞团解散直到得到单个细胞(小心地减少泡沫地形成)。

14.     将细胞转移入全新的预先包被的6孔板中,加入含ROCK抑制剂的完全培养基(6孔板中的每孔添加2ml SFM,分流比是1:6-1:12)

15.     在一个5% CO2或5% O2(低氧孵育器)的孵育器中37 oC过夜孵育。

16.     第二天更换培养基为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基,每天更换培养基直到细胞达到80-90%的覆盖度并继代培养细胞或为了长期贮存在液氮中冷冻细胞。

问题解答

在细胞裂解液中的孵育时间是依赖于细胞密度和细胞数量。

如果细胞是分离的,加入同样体积的细胞并重悬浮细胞,在15ml离心管中收获细胞,细胞离心plate the cells.

StemmeraTM无血清冻存液中冻存干细胞

17.     冷冻前1-2小时更换培养基。

18.     重复完全培养基StemmeraTM hStemSFM中继代培养干细胞步骤中的9-13步完成细胞的收集。

19.     将1ml的单细胞悬液转入15ml的离心管中。

20.     在1000转下离心5min。

21.     吸弃上清,避免干扰细胞颗粒。

22.     按2x106活细胞/毫升的细胞密度的要求计算冻存液体积。

23.     在精确体积下用StemmeraTM无血清冻存液重悬浮细胞颗粒 (货号ST03002)并将细胞等份分装到冷冻管中(1mll/管)。

24.     以自动或手动控制速率的冷冻装置按照标准程序实现冷冻(每分钟降低1oC)。

25.     转移冷冻细胞到气相的液氮中。我们建议在-200oC到-150oC气相中,存储可长达几年之久。

质量控制

本品用于维持人ESCs/iPSCs细胞在无血清/无饲养层培养基下的多能性。为了保证质量,下面的图片代表了人ESCs/iPSCs细胞在StemmeraTM hStemSFM培养基在基质膜包被的板子上的多能性的形态。

Product

Catalog no.

Size

碱性磷酸酶检测试剂盒(即用型)-蓝色

ST01001

50 tests

碱性磷酸酶检测试剂盒(即用型)-红色

ST01002

50 tests

人胚胎干细胞/诱导多能干细胞无异源动物成分培养基(hStemXFM)

ST02002

500ml

非酶细胞裂解液 (1X)

ST03001

100ml

 

无血清人胚胎干细胞/诱导多能干细胞冻存液

ST03002

50 ml

产品链接:http://www.bioconsumable.com/cn/br/Medium/01/Medium8635063722786343.htm